10份蛋白质技术相关protocol免费领,快转给需要的人(含ppt)

上一次,小编整理了13份分子克隆技术操作protocol(详情戳),得到了大家的齐刷刷的点赞,现在,小编又整理了蛋白质相关的操作技术protocol,希望能帮到刚步入生命研究领域的你。

1:蛋白质的表达、分离、纯化实验

携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌 BL21 中,在 37℃, IPTG 诱导下,超量表达携带有 6 个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白,该蛋白可用一种通过共价偶连的次氨基三乙酸(NTA)使镍离子(Ni2+)固相化的层析介质加以提纯,实为金属螯合亲和层析(MCAC)。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。

2:SDS-PAGE 蛋白质样品的制备

将收集的各样品加入等体积的 2×SDS-PAGE Loading Buffer, 煮沸裂解 5min,冰浴2min, 12,000rpm 离心 10min,取上清-20℃保存备用。

3:Western blot 详细操作步骤(含ppt)

一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志,检测蛋白质的方法很多,除 ELISA 法外,也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。前两法有“南” 和“北”之意,故本法遂被延伸称为 Western(西)印迹法,该法能用 SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳分辨出与专一抗血清结合的专一性蛋白质。

4:蛋白质含量测定法

蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret 法)、 Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford 法)。其中 Bradford 法和 Lowry 法灵敏度最高,比紫外吸收法灵敏 10~20 倍,比 Biuret 法灵敏 100 倍以上。定氮法虽然比较复杂,但较准确,往往以定氮法测定的蛋白质作为其他方法的标准蛋白质。

5:ELISA步骤、试剂及注意事项

酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,简写ELISA)指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上,利用抗原抗体特异性结合进行免疫反应的定性和定量检测方法。

6:病毒感染细胞实验整体流程及原理

目的基因不能直接整合到大多数真核细胞,常用的手段是将目的基因包装成病毒来感染细胞,从而得到表达满足实验需求。

7:电聚焦电泳法测定蛋白质的等电点

等电聚焦(Isoelectric focusing,简称 IEF)是六十年代中期出现的新技术。近年来等电聚焦技术有了新的进展,已迅速发展成为一门成熟的近代生化实验技术。目前等电聚焦技术已可以分辨等电点(pI)只差 0.001pH 单位的生物分子。由于其分辨力高,重复性好,样品容量大,操作简便迅速,在生物化学、分子生物学及临床医学研究中得到广泛的应用。

8:免疫共沉淀 Co-IP 实验操作步骤

免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。其原理是:当细胞在非变性条件下被裂解时,完整细胞内存在的许多蛋白质-蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质 X 的抗体免疫沉淀 X,那么与 X 在体内结合的蛋白质 Y 也能沉淀下来。目前多用精制的prorein A 预先结合固化在 argarose的 beads 上,使之与含有抗原的溶液及抗体反应后,beads 上的 prorein A 就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。

9:免疫组化操作步骤

免疫组化,是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究,称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry)。

10:双向电泳操作步骤及相关试剂配制

2-DE 的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白初步分离,第二向 SDS-PAGE 是基于蛋白质分子量不同,而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。

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