之前,小编整理过13份分子克隆技术操作protocol(详情戳),10份蛋白质技术相关protocol(详情戳),得到了大家的齐刷刷的点赞,现在,小编又整理了细胞培养相关的操作技术protocol,希望能帮到刚步入生命研究领域的你。

B 淋巴细胞分离技术

膜表面免疫球蛋白(SmIg),是B细胞特有的表面标志,它既是 B 细胞识别抗原的受体,与相应抗原特异性结合;又是表面抗原,能与相应的抗 Ig 的抗体结合,故可用荧光标记的抗 Ig 抗体作免疫荧光镜检,以查出 B 淋巴细胞。

MTT 法测定细胞相对数和相对活力

噻唑兰,简称 MTT,可透过细胞膜进入细胞内,活细胞线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性MTT 还原为难溶于水的蓝紫色的 Formazan 结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜溶解,用酶联免疫检测仪在 490nm 波长处测定其光吸收值,可间接反映细胞数量。

Transwell 实验方法

Transwell 是一种实验技术,这项技术的主要材料是 Transwell 小室(Transwell chamber, Transwell insert),其外形为一个可放置在孔板里的小杯子,不同厂家对 Transwell 会有不同的命名,而不同型号也可有不同形状,不同大小,根据实验需要,可有不同选择。

TUNEL 法检测细胞凋亡实验原理和方法

TUNEL 或缺口翻译法实际上是分子生物学与形态学相结合的研究方法,对完整的单个
凋亡细胞核或凋亡小体进行原位染色,能准确的反应细胞凋亡最典型的生物化学和形态特征,可用于石蜡包埋组织切片、冰冻组织切片、培养的细胞和从组织中分离的细胞的细胞凋亡测定,并可检测出极少量的凋亡细胞,灵敏度远比一般的组织化学和生物化学测定法要高,因而在细胞凋亡的研究中已被广泛采用。

T 淋巴细胞分离技术

粘附的细胞可通过 trypsin 洗脱而收集。葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法和Percoll 不连续密度梯度离心法等是根据细胞的大小及比重的差异进行细胞分离。 E 花环沉淀分离技术主要是利用细胞表面标志进行细胞分离。

尚可利用特异性单克隆抗体结合其它技术分选细胞,如补体细胞毒分离法,洗淘分离法(panning)、流式细胞术分离法,以及免疫磁珠法分离细胞技术等。一般应根据实验的目的及所需细胞的种类、纯度及数量等要求来确定采用何种方法。

流式检测细胞凋亡

Annexin V 是检测细胞凋亡的灵敏指标之一。它是一种磷脂结合蛋白,可以与早期凋亡细胞的胞膜结合,而细胞质膜的改变是细胞发生凋亡时最早的改变之一。

细胞凋亡检测,细胞凋亡实验步骤,检测方法

只定性的研究方法:常规琼脂糖凝胶电泳、脉冲场倒转琼脂糖凝胶电泳、形态学观察(普通光学显微镜、透射电镜、荧光显微镜)进行定量或半定量的研究方法:各种流式细胞仪方法、原位末端标记法、 ELISA 定量琼脂糖凝胶电泳。

细胞凋亡检测实验(Annexin V/PI 双染色法)

细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,目前早期识别仍有困难。这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使 PS 暴露在细胞膜外表面。 PS 是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使 PS 暴露在细胞膜外。

Annexin V 是一种 Ca+依赖的磷脂结合蛋白,最初发现是一种具有很强的抗凝血特性的血管蛋白, Annexin V 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性。对 PS 有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。

抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶对肿瘤细胞迁移的影响

细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。其借鉴体外细胞致伤愈合实验模型,在体外培养的单层细胞上,划痕致伤, 然后加入药物观察其抑制肿瘤细胞迁移的能力。

细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏

细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散后,从一个容器以 1: 2 或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是细胞的代数。

细胞周期测定实验

体外培养细胞生长、分裂繁殖的能力,可用分裂指数来表示。它与生长曲线有一定的联系,如随着分裂指数的不断提高,细胞也就进入了指数生长期。分裂指数指细胞 群体中分裂细胞 所占的百分比,它是测定细胞周期的一个重要指标,也是不同实验研究选择细胞的重要依据。

原代细胞培养和传代培养的方法

将动物机体的各种组织从机体中取出,经各种酶(常用胰蛋白酶)、螯合剂(常用 EDTA)或机械方法处理,分散成单细胞,置合适的培养基中培养,使细胞得以生存、生长和繁殖,这一过程称原代培养。

原代细胞的培养与建系

凡是来源于胚胎、组织器官及外周血,经特殊分离方法制备而来的原初培养的细胞称之为原代细胞。细胞的纯化或细胞克隆技术是细胞培养工作的基础。

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